유전자가위의 구성성분인 gRNA의 말단 인산 그룹의 면역반응 비교© News1

기초과학연구원(IBS) 유전체 교정 연구단(단장 김진수) 연구진이 크리스퍼 유전자가위(CRISPR Cas9 or CRISPR Cpf1)의 효율을 저해하는 요인을 새롭게 밝혔다.23일 IBS에 따르면 연구진은 세포에 유전자가위를 주입 시 가이드 RNA(guide RNA, 이하 gRNA)의 말단 인산(phosphate) 그룹이 면역반응을 유발하고, 세포 독성으로 인해 유전자가위의 유전자 변이 효율을 떨어뜨린다고 밝혔다. 반대로 인산 그룹을 제거하면 변이 효율을 높일 수 있다.

유전자가위 구성요소 중 하나인 gRNA는 교정할 염기서열을 인식하는 역할을 수행한다.

연구진은 유전자가위를 gRNA와 절단 효소를 복합체 형태로 만들어 세포에 주입할 때 면역반응이 일어나 유전자 변이 효율이 떨어지는 문제에 주목했다.

이를 통해 gRNA의 말단에 붙은 인산 그룹이 외부물질로 인식돼 세포 내 면역반응이 유발되는 것을 확인했다.실험 결과 연구진은 복합체 형태의 유전자가위가 세포에 주입되면 DDX58 면역 유도 수용체가 gRNA 말단의 인산 그룹을 외부물질로 인식해 즉각 면역체계를 발동시킨다는 것을 증명했다.

DDX58 면역 유도 수용체가 세포 사멸을 일으키는 인자인 유형 Ⅰ 인터페론(type Ⅰ interferon)을 활성화시켜 면역반응을 유발하는 것이다.

이러한 원인을 파악한 연구진은 gRNA 말단의 인산 그룹을 제거해 면역반응을 피하는 방식을 고안했다. gRNA를 세포에 주입하기 전에 인산을 분해하는 효소를 처리해 외부물질로 인식될 여지를 없애는 것이다.

연구진은 인산 그룹이 제거된 gRNA와 절단 효소를 결합해 유전자가위 복합체 형태를 만든 뒤 이를 유전자 교정 효율이 낮다고 알려진 T 면역세포에 주입했다. 

이를 통해 인산 그룹이 제거된 유전자가위를 T 면역세포에 적용하자 면역반응이 나타나지 않는 것을 확인했다.

세포내 면역반응을 피해 세포사멸을 최소화하는 유전자가위 복합체 도입 방법을 개발한 것이다.

연구진은 또 인산 그룹이 제거된 유전자가위를 T 면역세포 내 CCR5 유전자에 적용해 95% 변이 효율을 달성했다.

CCR5 유전자는 후천성면역결핍증(AIDS, 이하 에이즈) 원인 바이러스인 HIV의 수용체로 알려져 있다. 에이즈 환자의 T 면역세포의 CCR5 유전자를 제거하면 면역세포 기능에는 영향을 주지 않으면서도 HIV 감염에는 저항성을 부여할 수 있기 때문에 세포 치료법의 활용이 가능하다.

이번 연구는 면역반응을 피하는 유전자가위 복합체 전달 방식을 개발해 T 면역세포의 CCR5 변이를 높은 효율로 유도했다는 데 큰 의미가 있다.

향후 T 면역세포를 몸 밖으로 꺼낸 후 크리스퍼 유전자가위를 이용해 CCR5 유전자를 제거하고 재주입하는 방식의 에이즈 세포 치료법에도 활용이 가능할 것으로 보인다.

연구진은 “gRNA 말단의 인산 그룹을 제거하는 방식은 간단하면서도 저렴한 사전 공정으로 면역반응을 유발하지 않는 효율 높은 gRNA를 제작할 수 있다는 장점이 있다”며 “특히 에이즈 세포치료제 등 유전자가위를 사용하는 다양한 치료법에 적용될 수 있다”고 밝혔다.

이번 연구 결과는 콜드스프링하버연구소 출판(CSHLP)에서 발행하는 생화학 및 분자생물학 분야 국제 학술지 ‘지놈 리서치(Genome Research)’ 온라인 판에  23일 오전 3시 게재됐다.


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